Bestimmung und Identifizierung von Flavonoiden in Gerste mit HPLC-DAD-MS/MS / Heike Wollersen. 2004
Inhalt
- DANKSAGUNG
- Einleitung
- Problemstellung und Zielsetzung
- Struktureller Aufbau, Pharmakologische Wirkung und Metabolismus der Flavonoide
- Vorkommen, Bedeutung und Analytik von Flavonoiden in Brauprozessproben
- Flavonoide in Gerste
- Die Rolle der Flavonoide im Brauprozess
- Bestimmung von Flavonoiden in Brauprozessproben
- Ergebnisse und Diskussion
- Versuche zur Darstellung von Procyanidin B3 als Referenzsubstanz
- Bestimmung von (+)˚Catechin in Gerste mittels HPLC-DAD
- Bestimmung von Flavonoiden in Gerste mittels HPLC-DAD
- Zusammenfassung der Ergebnisse der Methodenentwicklung
- Validierung des entwickelten HPLC-DAD-Verfahrens
- Wahl des Arbeitsbereiches
- Linearität
- Nachweis- und Bestimmungsgrenze
- Stabilität
- Spezifität
- Spezifitätstest durch Vergleich der Retentionszeiten
- Spezifitätstest durch Vergleich der UV-Spektren
- Spezifitätstest durch Vergleich der Massenspektren (LC-ESI-MS)
- Präzision
- Richtigkeit
- Robustheit
- Zusammenfassung der Validierungsergebnisse
- Identifizierung in Gerste enthaltener Flavonoide mittels LC-DAD-MS/MS-Kopplung
- Kollisionsexperimente mit monomeren Flavonoiden
- Precursor-Ion-Scan-Experimente mit Gerstenextrakten
- Identifizierung einzelner Gersteninhaltsstoffe mittels MSn-Untersuchungen
- Zusammenfassung der LC-MS-Identifizierungsergebnisse: Essigsäure/Acetonitril-Gradienten E2
- Zusammenfassung der LC-MS-Identifizierungsergebnisse: Phosphatpuffer/Acetonitril-Gradienten P2
- Bestimmung von Flavonoiden in Realproben
- Experimenteller Teil
- Chemikalien
- Geräte
- HPLC-DAD-System
- LC-DAD-MS/MS Ion-Trap-System
- LC-MS/MS Triple-Quadrupol-System
- NMR-Spektrometer
- Spektrophotometer
- pH-Meter
- Lösungen
- Versuche zur Darstellung von Procyanidin B3
- Methodenentwicklung
- Entwicklung der HPLC-DAD-Bedingungen für (+)˚Catechin
- UV-Absorptionsmaximum
- pKs-Wert
- Mobile Phase
- Lösemittel der Messprobe
- Vorauswahl der analytischen Trennsäule
- Optimierung der Probenvorbereitung
- Optimierung der HPLC-DAD-Bedingungen
- Validierung des HPLC-DAD-Verfahrens
- Linearer Bereich
- Kalibriergerade
- Stabilität von (+)˚Catechin in Kalibrierlösungen
- Stabilität von (+)˚Catechin in Realproben
- Spezifität
- Spezifitätstest durch Vergleich der Retentionszeiten
- Spezifitätstest durch Vergleich der Massenspektren
- Präzision
- Wiederfindung
- Robustheit
- Identifizierung in Gerste enthaltener Flavonoide mittels LC-DAD-MS/MS-Kopplung
- Kollisionsexperimente mit monomeren Flavonoiden
- Precursor-Ion-Scan-Experimente mit Gerstenextrakten
- Identifizierung einzelner Gersteninhaltsstoffe durch MSn-Untersuchungen
- Bestimmung von Flavonoiden in Realproben
- Literatur
- Anhang
- Bestimmung des pKs-Wertes von (+)-Catechin
- Säulentest
- Kalibrierdaten des HPLC-DAD-Verfahrens
- Ausreißertest nach GRUBBS
- Anpassungstest nach MANDEL [279]
- Residualanalyse
- Test auf Homogenität der Varianzen
- Absicherung der unteren Arbeitsgrenze
- Empfindlichkeit
- Stabilitätsberechnungen
- Tag-zu-Tag-Präzision
- Übersicht der Messdaten der MSn-Untersuchungen
- Kalibrierdaten des LC-DAD-MS/MS-Verfahrens